PRUEBA PARA VIH ( TAMIZAJE POR INMUNOCROMATOGRAFIA )

la mayoria de los pacientes con SIDA tienen anticuerpos para las proteinas estructurales del virus de VIH es mas una proporcion de miembros de grupos de alto riesgo clinicamente saludables  como los homosexuales , hemofilicos o adictos a las drogas son tambien seropositivos. la infeccion por VIH se diagnostica mediante la deteccion de anticuerpos especificos para el virus . actualmente se conocen dos tipos de VIH : VIH-1 y VIH-2

durante la prueba se aplican dos gotas suero plasma o sangre total del area de muestra seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja qeue reaccionen. los anticuerpos igG especificos para las proteinas recombinantes del VIH-1 y VIH-2 reaccionaran con los antigenos unidos a las particulas de oro coloidal .el complejo de oro coloidal anticuerpos se mueve cromatograficamente a traves de la membrana a las regiones de prueba y control del casete de prueba . una reaccion positiva se visualiza  por una banda de color rosa purpura

obtener la muestra por puncion venosa
centrifugar a 2500 rmp por 5 minutos  para obtener suero
marcar cada prueba  con la informacion del paciente
tomar 2 gotas de suero  utilizando la pipeta proporcionada en el equipo y colocarlas cuidadosamente en el area de prueba del casete

DIAGNOSTICO DE TREPONEMA PALLIDUM POR EL METODO DE VDRL

Se diagnostica mediante la demostración de organismos en una lesión primaria o secundaria. la serologia constituye el metodo de laboratorio mas comúnmente utilizado en el diagnostico de esta enfermedad.
la sifilis se basa normalmente en dos grupos generales de procedimientos en prueba de antigenos no treponemicos y la prueba de antígeno treponemico fluorescente
la reagina es una sustancia que aparece en la sangre esta sustancia flocula las emulsionesde una solucion alcoholica al 0.03% de cardiolipina
para esta prueba se necesita suero , placas  lavadas y desgrasadas  kit para determinar VDRL

PROCEDIMIENRTO
el suero obtenido por centrifugacion se calienta a 56 grados centigrados  durante 30 minutos  o a 62 grados centigrados  durante tres minutos
medir 0.05 mL de suero inactivado y colocarlo en la placa de vidrio añada una gota de emulsion de antigeno a cada suero
haga la rotacion de la placa durante 4 minutos

DETERMINACION DEL SISTEMA ABO METODO INVERSO

El sistema ABO es uno de los varios sistemas que sirven para identificar que tipo de sangre tiene, es decir, el tipo de sangre que usted tenga depende de si hay o no ciertas proteínas, llamadas antígenos en sus glóbulos rojos
El fundamento de esta practica es la identificación de los anticuerpos naturales del sistema ABO  se realiza utilizando antígenos conocidos A B y O  que al ponerlos en contacto   con el suero problema se manifiesta por medio de una aglutinación.

PROCEDIMIENTO
1.- rotular los tubos con el numero de la muestra y la letra de los eritrocitos correspondiente
2.-agregar dos gotas del suero del paciente (suero problema )a cada uno de los tubos
3.-agregar una gota de eritrocitos al 5% a cada tubo
4..-centrifugar a 1000 r.p.m por un minuto
5.- observar la aglutinación deben de mostrar contra quienes  actúa el antígeno

EJEMPLO:
grupo             aglutinacion            

A                    POSITIVO        
B                    POSITIVO
AB                 POSITIVO

El grupo sanguíneo del paciente es "O"

TITULACION DE ANTICUERPOS

La titulación de anticuerpos determina la presencia y la concentración  de anticuerpos en la sangre. El titulo de un anticuerpo, es la dilucion máxima en la que su presencia puede ser demostrada por aglutinación.
la razon por la que se hace esta practica es para encontrar anticuerpos específicos activos en el suero del paciente contra eritrocitos del donador i viceversa.

PROCEDIMIENTO 
1.- el tubo con sangre se centrifuga a 3500 r.p.m por 5 minutos para separar el suero de la sangre 
2.-se rotula 10 tubos numéricamente
3.- se les agrega 0.5 mL de solución salina a cada uno
4.- se le agrega 0.5mL de suero al primer tubo 
5.- de este primer tubo se obtiene 0.5 mL y se pasa el segundo tubo y así sucesivamente 
6.- en el ultimo tubo se obtiene el 0.5 mL y se desecha para obtener un balance en los tubos
7.-se coloca dos gotas de la suspensión del paquete celular contrario al tipo sanguíneo del paciente
8.- los tubos se colocan en una centrifuga a  1500 r.p.m por dos minutos
9.-de los botones obtenidos en los tubos después de la centrifuga; agitar suavemente para observar la aglutinación. proceder a realizar la lectura  

por ejemplo 

no. del tubo                                               titulación                                           aglutinacion 
1                                                                     1:2                                                   positivo     
2                                                                     1:4                                                   positivo     
3                                                                     1:8                                                   positivo     
4                                                                     1:16                                                 positivo     
5                                                                     1:32                                                 positivo     
6                                                                     1:64                                                 negativo    
7                                                                     1:128                                               negativo    
8                                                                     1:256                                               negativo    
9                                                                     1:512                                               negativo    
10                                                                   1:1024                                             negativo    

PRUEBA DE COOMBS

La prueba de coombs el suero permite establecer la presencia de globulina y también de anticuerpos , el suero de coombs es ideal  por que tiene anticuerpos contra las globulinas sericas humanas que abarcan  cuatro alfa 1  alfa 2 beta y gamma y dentro de estos grupos se encuentran anticuerpos  anti Rh anti-duffy anti-kell el suero de coombs se obtiene por inyecciones repetidas de sueros humanos grupo O a conejos el animal  sensibilizado produce anticuerpos contra la fracción globulinica de las proteínas sericas y contra anticuerpos incompletos.

PRUEBAS CRUZADAS

Las pruebas cruzadas  es una serie de pruebas que buscan interacciones perjudiciales entre la sangre de  un paciente y un donante  las pruebas se hacen antes de una transfucion sanguínea estas serie de pruebas se divide en 3  prueba mayor que contiene el suero del paciente y eritrocitos del donador , prueba menor  que contiene el suero del donador  y los eritrocitos del paciente y el autotestigo que contiene el suero  y eritrocitos del paciente

las pruebas cruzadas detectan reacciones ag-ac  antes de la transfucion. Esta prueba se realiza   por necesidad critica de sangre , intervenciones quirúrgicas , hemorragia aguda entre otros.

PRUEBA DE LA VARIANTE D (U)

                             

El factor Du es una variante del factor D, que tiene gran importancia en las pruebas de laboratorio porque es antigénica y es importante para saber si es compatible en las transfusiones de sangre, transplantes y embarazos, de tal manera que no haya problemas en el organismo de una persona.

  I. Incubar el tubo la muestra (que dio negativo en el Rh negativo de la determinación D)a 37º de 10 min

   2  Lavar los eritrocitos de la siguiente manera:

 3  Agregar 3 gotas de SSF y agitar suavemente para Resuspender los eritrocitos posteriormente llenar dos terceras partes del fondo con SSF procurando que quede una suspensión.

   4   Centrifugar a 3400 rpm por 3 min, decantar

   5Repetir tres veces el paso anterior, en el ultimo lavado decantar perfectamente.

  6  Agregar 2 gotas de suero de Coombs y mezclar

   7. Centrifugar  1000 rpm 1 min

   8 Resuspender suavemente el botón de eritrocitos del fondo y observar la aglutinación